2010/05/31
ラクトバチルス酸、ペプトストレプトコッカス属、サルシン、及び酵母はまたイヌの細菌叢を構成するもので、ガス産生能力を持つ・・・
ワーナー・ＮＳ＆ヴァンクライニンゲン・ＨＪ イヌの胃におけるクロストリジウムの発生率と急性胃拡張との関係 アメリカ動物病院協会ジャーナル１９７８年９/１０月号第１４巻はじめに急性胃拡張（ＡＧＤ）は多くの動物種が罹る、突発性の、しばしば末期の胃腸疾患である。イヌでは大きな犬種に最もよく発症する。以前の研究では、細菌発酵が胃のガス発生源であるとの多因子的な病理発生を示した。クロストリジウム・パーフリンジェンスは嫌気性菌であり、活発なガス産生で知られ、ＡＧＤの症例では対照のイヌに比べて多く見られ、より頻回に剖検で回収されることから特に注目されていた。
ＡＧＤにおける胃のクロストリジウムの役割についてさらに追及するため、この研究を実施した。我々の目標は、１）１００匹の健常なイヌにおける、胃のクロストリジウムの発生率を同定及び判定し、２）分離したＣ・パーフリンジエンス有機体の毒素発生性、毒素の種類、及び/または血清株を判定し、３）健常なイヌからクロストリジウムとＡＧＤ症例で見られるクロストリジウムの比較を行い、そして、４）ＡＧＤ症例の胃内容物におけるマウス致死性のＣ・パーフリンジェンス毒素の探索を行うことである（中略）。
結果１００匹の健常なイヌにおける所見
検体の３９％でグラム陽性有機体が占めた一方で、グラム陰性菌有機体は２５％であった。検体の３１％では、グラム陽性とグラム陰性が同等に分布したが、残り５％の塗抹標本では酵母とスピロヘータが多くを占めた（表１）。
血液寒天培地での通気培養法により、同様の微生物の異種組み合わせが明らかになった。グラム染色塗抹標本でのように、単一の微生物群が多数を占める事はなかった。１１％の症例でグラム陰性有機体が最も数が多く、５０％の症例ではグラム陽性タイプで、その一方、３７％の検体では同等数であった。血液培養での初期の分離は症例の２％で陰性であった（表２）。
１００匹の正常なイヌのうち、７２匹の胃内容物からクロストリジウムを分離した（表３）。多くは用いられた３種類の固形培地での初期分離から回収した。７２のクロストリジウム分離物のうち、７０をＣ・パーフリンジエンスと同定した。２症例でクロストリジウム・バイファーメンタンスを同定し、同定されなかった２つのクロストリジウムｓｐｐ．はやはりＣ・パーフリンジェンスを収量した症例から分離した（表４）。
全てのＣ・パーフリンジェンス培養物からの毒素は実験マウスに対し非致死性であった（表４）。１７のＣ・パーフリンジェンス分離物で、ホッブス型の抗血清に対し陽性凝集を呈した。菌分布は変化に富んでいた（表５）。ＣＤＣ（疾病予防管理センター）によって処理された分離物は全て、９１の抗血清いずれにおいても既知のＣ・パーフリンジェンス株に対し凝集しなかった。
ＡＧＤ症例における所見９症例のＡＧＤについて調査を行った。これらのうち、７匹は死亡し、症例１のみ死亡前に抗生物質で治療を行った。これらのうち５症例（症例２、５、６、７、９、）は死亡して見つかったか、または何らかの治療を試みようとした以前に死亡したかのいずれかであった。症例８にシメチコンを含有する制酸剤（Mylanta.Stuart Pharmaceuticals,Wilmington,DE）を死亡数時間前に投与した。追加の２症例（症例３と４）を鼓脹の早期段階で提起し、飼い主の要請により治療せず安楽死となった。表６はＡＧＤの９症例をまとめたものである。
９症例中８症例から得た、ガス産生性胃内容物のグラム染色した塗抹標本により、これら検体の７症例でグラム陽性有機体が多くを占めていた。表１にあるように、グラム陽性有機体の種類は多くのものが存在した。グラム陰性有機体は症例９で主要な種類を示したが、それを除いては、各症例で少量の発生であった。ＡＧＤの各症例において、グラム染色塗抹標本で見られた有機体と、嫌気性血液寒天培地プレートでの初期分離から得た有機体の間に、よい相関があることが分かった（表２）。
クロストリジウムをＡＧＤの９症例中６症例から分離した。それぞれをＣ・パーフリンジェンスと同定した（表３と４）。各分離物は実験マウスにとって非致死性であり、２つの分離物がホッブス型抗血清を凝集した。４つの分離物でＣ・パーフリンジェンスの９１の血清株のどれにも陽性反応を示さなかった。症例４、５、及び６の胃内容物の致死性Ｃ・パーフリンジェンスの存在を調査した。存在は確認されなかった。
考察１００匹の健常なイヌ
胃内容物の塗抹標本及び培養を検討した後明らかになったことは、健常なイヌの胃から微生物はめったに排泄されないことである。このことは摂取物を含まない胃、死後ただちに標本化された胃でもその通りであった（表７と８）。微生物の存在は犬種及び/又は動物の重量に関連なかった（表９）。これら多数の胃の微生物は、生存可能な嫌気性菌であった。
表１で示される通り、新鮮な胃内容物の塗抹標本中には、グラム陽性桿菌及び球菌、グラム陰性桿菌及び球菌、酵母、そしてスピロヘータなど様々な微生物が観察された。これら微生物の分布は非常に可変性があり、大部分のサンプルで単一形態群の優位はないと見られる。この可変性はおそらく食餌、摂取物の量、胃のｐｈ、胃の運動性、死亡とサンプリングの間隔の違い、及びその他の因子のためと思われる。
１００匹の健常なイヌのうち、７２匹に胃内容物のクロストリジウムが存在し、これら７０の分離物をＣ・パーフリンジェンスとして同定したことは、この有機体が健常なイヌの胃に生息することを示している。様々な犬種の胃内容物及び、摂取物が排泄され、死後直ちにサンプリングした胃においてこの細菌が継続的に示されることは、これを実証するものである。他に数人の研究者らもまたＣ・パーフリンジェンスを健康な動物から分離した。細菌叢に対するクロストリジウム有機体の比率は可動性が高かった。クロストリジウムが優位な微生物であった健常なイヌがおり、それらを示すために、繰り返し分離を試みることが必要な症例があった。
Ｃ・パーフリンジェンス以外のクロストリジウム種を、健常なイヌから継続的に分離できなかったことは、他の種はイヌの胃をコロニー形成することができず、非常に少数で存在し、あるいはサンプリング技術が証明するのに適切でなかった事を示唆している。予備試験の間、使用された培地で多くの偏好性クロストリジウムを分離し同定したため、はじめの２つの可能性のうち１つが支持される。
健常なイヌのＣ・パーフリンジェンス分離物の血清学的、また毒性試験の結果は、それらが血清学的及び毒素非産生株の組み合わせからなっていいる事を示している。一部の分離物が、二次培養及び保存中に毒素産生性を喪失した可能性が考えられるが、これがどの症例にも起こったことは考えにくい。
ＡＧＤ症例試験を行った自然発症のＡＧＤ９症例それぞれにおいて、生存可能な嫌気性微生物が見られ、回収された。多くの症例の塗抹標本及び培養において、グラム陽性が優位なことが注目された。対照サンプルのように、優位であったグラム陽性有機体の種類は変化に富んでいた。ＡＧＤ症例の胃の内容物におけるグラム陽性有機体の優位性は、初期所見に一致する。クロストリジウムに類似しているグラム陽性桿菌がＣ・パーフリンジェンスを収量した各症例で見られたが、優位な数では存在しなかった。鼓脹早期に安楽死となり、直ちに剖検を行った症例は、その後、線状及び球状細菌と比較して低濃度の短いグラム陽性桿菌を収量した。これらの症例で観察した変動性は、健常なイヌに比べて、ＡＧＤ症例には非常に大量の胃内容物が存在することを反映するものであろう。強調すべきは、ＡＧＤ症例からの各検体は、培養している時に、盛んにガスを産生していた事である。微生物の発酵がこのガスの発生源であれば、原因となる有機体が塗抹標本、接種培地、或いは両方で、継続的に観察されるのが妥当と思える。このように遭遇する変動性は理解しがたい。ＡＧＤ症例から分離したクロストリジウムの発生率と種類は、１００匹の対照サンプルから得たものと類似していた。対照及びＡＧＤ症例両方から得た、それらＣ・パーフリンジェンスと同定したクロストリジウムは毒素非産生性であり、血清株の組み合わせでなっていた（中略）。
ＡＧＤの病因ＡＧＤ症例の胃内容物における明らかなガス発生、このガスの可燃性質、自然及び実験ＡＧＤ症例に見られた胃の二酸化炭素と水素の顕著な増加は、ＡＧＤが細菌発酵により発生することを示している。ガス産生性クロストリジウムの分離、胃を結紮したイヌの熱処理した胃内容物によるＡＧＤの実験的発生、そして鼓脹症例の大部分におけるＣ・パーフリンジェンスの存在はＣ・パーフリンジェンスが病因菌である事を示した。ＡＧＤとこの微生物による他の胃腸疾患を比較しながら、さらに推測した。ＡＧＤと他のクロストリジウム胃腸疾患の特徴には、暴飲暴食、徴候の突然発症、及び大量のガスの蓄積がある。このような増加が、おそらく食餌の変化や高タンパク又は高炭水化物を与えることで起こるという事が示されている（中略）。
この研究で示した事は、クロストリジウムが７２％の健康なイヌの胃に、そして６７％のＡＧＤ症例に存在することであった。追加の、或いは代わりとなる方法があれば、おそらく全てのイヌにおける存在を確認しただろう（以下省略）。
